1. 常規(guī)石蠟切片60℃烤片2小時；

2. 脫蠟。二甲苯脫蠟15min，兩次；

3. 水化。依次用無水乙醇、95%、90%、80%、70%，各一次2min，之后在蒸餾水中孵育5min；

4. PBS（pH7.4）浸泡5min；

5. 抗原修復(fù)：高壓修復(fù)（EDTA，pH8.0或0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液，pH6.0高壓10-15min），PBS洗2-3min；

6. 3% H₂O₂去離子水37℃孵育10min，PBS洗；

7. 正常山羊血清封閉，37℃孵育10-20min，勿洗；

8. 適當(dāng)比例的一抗工作液孵育，4℃過夜或37℃ 1h；

9. 復(fù)溫20min，PBS洗3min，三次；

10. 二抗孵育：加生物素化標(biāo)記二抗，37℃，10-15min，PBS洗3min，三次；

11. 三抗孵育：加辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素，37℃，10-15min，PBS洗3min，三次；

12. 加DAB顯色劑顯色，鏡下觀察結(jié)果，適時終止；

13. 蘇木素復(fù)染5min，自來水沖洗片刻，75%的鹽酸酒精溶液分化30s，自來水沖洗5min藍(lán)化；

14. 脫水。依次經(jīng)過70%、80%、90%、95%、無水乙醇，各2min，二甲苯15min，三次；

15. 封片，中性樹膠封片。

光學(xué)顯微鏡100×或400×觀察，拍片。

圖象評分。