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 產(chǎn)品專欄
人IL8酶聯(lián)免疫試劑盒說明書
作者:江蘇鎮(zhèn)江厚普生物科技有限公司  來源:  發(fā)表時(shí)間:[2011-6-18]  點(diǎn)擊:1280

人白細(xì)胞介素8(IL-8)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒使用說明書

使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,來檢測(cè)人白細(xì)胞介素8(IL-8),只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

用    途: 用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素8(IL-8)的測(cè)定。

工作原理

本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定樣品中人白細(xì)胞介素8(IL-8)的水平。向預(yù)先包被了人白細(xì)胞介素8(IL-8)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入白細(xì)胞介素8(IL-8),溫育;洗滌后,加入HRP標(biāo)記過的白細(xì)胞介素8(IL-8)抗體。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人白細(xì)胞介素8(IL-8)的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成

1

標(biāo)準(zhǔn)品(1600ng/L)

0.5ml

7

顯色劑A液

6ml

2

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3ml

8

顯色劑B液

6ml

3

酶標(biāo)包被板

12孔×8條

9

終止液

6ml

4

酶標(biāo)試劑

6ml

10

說明書

1份

5

30倍濃縮洗滌液

20ml

11

封板膜

2張

6

樣品稀釋液

6ml

12

密封袋

1個(gè)

需要而未提供的試劑和器材

1.   37℃恒溫箱。

2.   標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

3.   精密移液器及一次性吸頭

4.   蒸餾水,

5.   一次性試管

6.   吸水紙

注意事項(xiàng)

1.   從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.   各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。

3.   建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測(cè)。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高,請(qǐng)先用PBS稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再按說明書操作進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

4.   嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

5.   為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

6.   不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7.   底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。

自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

標(biāo)本要求

1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作程序

1.   標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶請(qǐng)按照說明自行在小試管中倍比稀釋):

800ng/L (5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

400ng/L (4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

200ng/L (3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

100ng/L (2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

50ng/L   (1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.   分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50μl;在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。輕輕晃動(dòng)混勻,37℃溫育30分鐘。  

3.   棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。

4.   每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻,37℃溫育30分鐘。  

5.   棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。

6.   每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。

7.   取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

8.   測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度值(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

9.   根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

操作程序總結(jié):

準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘

洗板5次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘

洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色10分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計(jì)算

檢測(cè)范圍:30ng/L→1000ng/L。

規(guī)格:    96T/盒

保存:    2-8℃

有效期:  6個(gè)月(2-8℃)。

 

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