1. 細胞爬片；

2. PBS清洗標本 3次，各1 min。

3. 冷丙酮4℃固定15min（或用4%多聚甲醛室溫固定10~20min）；

4. 空氣干燥5min，PBS漂洗3min，3次；

5. 細胞通透：0.5% Triton X-100（溶于PBS）通透細胞，室溫15~30min（丙酮固定法不用此步驟）；

6. PBS漂洗2次，每次5min；

7. 3% H₂O₂去離子水室溫孵育10min，PBS洗；

8. 正常山羊血清封閉，37℃孵育10~20min，甩掉封閉液，勿洗；

9. 加適當比例的一抗工作液孵育，4℃過夜或37℃ 1~2h；

10.  PBS漂洗2次，每次5min；

11. 加入酶標二抗工作液，37℃，30-60min；

12. PBS漂洗2次，每次5min；

13. 加DAB顯色劑顯色（或AEC顯色），鏡下觀察結(jié)果，適時終止；

14. 蘇木素輕度復染；

15. 脫水透明。

16. 封片，中性樹膠封片。

光學顯微鏡觀察，拍片。圖象評分。